1. Мета: Ця процедура спрямована на забезпечення стандартизованої процедури для асептичних операцій та захисту стерильних приміщень.
2. Сфера застосування: лабораторія біологічних випробувань
3. Відповідальна особа: Супервайзер з контролю якості (QC)
4. Визначення: Немає
5. Заходи безпеки
Суворо виконуйте асептичні операції, щоб запобігти мікробному забрудненню; оператори повинні вимикати УФ-лампу перед входом до стерильного приміщення.
6. Процедури
6.1. Стерильне приміщення повинно бути обладнане стерильним операційним та буферним приміщенням. Чистота стерильної операційної повинна досягати класу 10000. Температура в приміщенні повинна підтримуватися на рівні 20-24°C, а вологість - на рівні 45-60%. Чистота чистого столу повинна досягати класу 100.
6.2. Стерильне приміщення слід підтримувати в чистоті, і суворо забороняється накопичувати сміття для запобігання забрудненню.
6.3. Суворо запобігайте забрудненню всього стерилізаційного обладнання та поживних середовищ. Ті, хто забруднений, повинні припинити їх використовувати.
6.4. Стерильне приміщення повинно бути оснащене дезінфікуючими засобами робочої концентрації, такими як 5% розчин крезолу, 70% спирт, 0,1% розчин хлорметіоніну тощо.
6.5. Стерильне приміщення слід регулярно стерилізувати та очищати відповідним дезінфікуючим засобом, щоб забезпечити відповідність чистоти стерильної кімнати вимогам.
6.6. Усі інструменти, прилади, посуд та інші предмети, які необхідно внести до стерильної кімнати, повинні бути щільно упаковані та простерилізовані відповідними методами.
6.7. Перед входом до стерильної кімнати персонал повинен вимити руки з милом або дезінфікуючим засобом, а потім переодягнутися в спеціальний робочий одяг, взуття, шапки, маски та рукавички в буферній кімнаті (або ще раз витерти руки 70% етанолом) перед входом до стерильної кімнати. Виконувати операції в бактеріальній камері.
6.8. Перед використанням стерильної кімнати необхідно увімкнути ультрафіолетову лампу для опромінення та стерилізації протягом більше ніж 30 хвилин, а також одночасно увімкнути обдування чистого столу повітрям. Після завершення операції стерильну кімнату слід своєчасно очистити, а потім простерилізувати ультрафіолетовим світлом протягом 20 хвилин.
6.9. Перед перевіркою зовнішня упаковка випробуваного зразка повинна бути цілою та не повинна відкриватися для запобігання забрудненню. Перед перевіркою для дезінфекції зовнішньої поверхні використовуйте ватні кульки з 70% спиртом.
6.10. Під час кожної операції слід проводити негативний контроль для перевірки надійності асептичної операції.
6.11. Під час поглинання бактеріальної рідини необхідно використовувати присоску. Не торкайтеся трубочки безпосередньо ротом.
6.12. Голку для інокуляції необхідно стерилізувати полум'ям перед та після кожного використання. Після охолодження культуру можна інокулювати.
6.13. Соломинки, пробірки, чашки Петрі та інший посуд, що містить бактеріальну рідину, слід замочити у стерилізаційному відрі, що містить 5% розчин лізолу, для дезінфекції, а через 24 години вийняти та промити.
6.14. Якщо на столі або підлозі пролита бактеріальна рідина, слід негайно залити забруднену ділянку 5% розчином карболової кислоти або 3% розчином лізолу та діяти щонайменше 30 хвилин перед обробкою. Якщо робочий одяг та головні убори забруднені бактеріальною рідиною, їх слід негайно зняти та випрати після стерилізації парою під високим тиском.
6.15. Усі предмети, що містять живі бактерії, необхідно продезінфікувати перед полосканням під краном. Суворо забороняється забруднювати каналізацію.
6.16. Кількість колоній у стерильному приміщенні слід перевіряти щомісяця. Відкривши чистий стіл, візьміть кілька стерильних чашок Петрі з внутрішнім діаметром 90 мм та асептично введіть близько 15 мл поживного агарового середовища, яке було розплавлено та охолоджено приблизно до 45°C. Після затвердіння поставте його догори дном при температурі 30-35°C. Інкубуйте протягом 48 годин в інкубаторі при температурі 30-35°C. Після підтвердження стерильності візьміть від 3 до 5 чашок та помістіть їх ліворуч, посередині та праворуч від робочого положення. Після відкриття кришки та витримки 30 хвилин помістіть їх догори дном в інкубатор при температурі 30-35°C на 48 годин та вийміть їх. Середня кількість різних бактерій на чашці в чистій зоні класу 100 не повинна перевищувати 1 колонію, а середня кількість у чистій кімнаті класу 10000 не повинна перевищувати 3 колонії. Якщо ліміт перевищено, стерильне приміщення слід ретельно продезінфікувати, доки повторні перевірки не відповідатимуть вимогам.
7. Зверніться до розділу (Метод перевірки стерильності) у «Методах перевірки гігієни лікарських засобів» та «Стандартних операційних практиках перевірки лікарських засобів у Китаї».
8. Відділ дистрибуції: Відділ управління якістю
Технічні інструкції щодо чистих приміщень:
Після отримання стерильного середовища та стерильних матеріалів ми повинні підтримувати стерильний стан, щоб вивчати конкретний відомий мікроорганізм або використовувати його функції. В іншому випадку різні мікроорганізми ззовні можуть легко змішуватися. Явище змішування нерелевантних мікроорганізмів ззовні називається контамінуючими бактеріями в мікробіології. Запобігання контамінації є критично важливою технікою в мікробіологічній роботі. Повна стерилізація, з одного боку, та запобігання контамінації, з іншого, є двома аспектами асептичної техніки. Крім того, ми повинні запобігти потраплянню досліджуваних мікроорганізмів, особливо патогенних мікроорганізмів або генетично модифікованих мікроорганізмів, які не існують у природі, з наших експериментальних контейнерів у зовнішнє середовище. Для цих цілей у мікробіології існує багато заходів.
Стерильна кімната зазвичай є невеликою кімнатою, спеціально обладнаною в мікробіологічній лабораторії. Може бути побудована з простирадл та скла. Площа не повинна бути занадто великою, приблизно 4-5 квадратних метрів, а висота має бути близько 2,5 метрів. Буферна кімната повинна бути облаштована зовні стерильної кімнати. Двері буферної кімнати та двері стерильної кімнати не повинні бути спрямовані в один бік, щоб запобігти потраплянню різних бактерій потоком повітря. Як стерильна кімната, так і буферна кімната повинні бути герметичними. Внутрішнє вентиляційне обладнання повинно мати пристрої для фільтрації повітря. Підлога та стіни стерильної кімнати повинні бути гладкими, важкодоступними для забруднення та легкими для очищення. Робоча поверхня повинна бути рівною. Як стерильна кімната, так і буферна кімната обладнані ультрафіолетовими лампами. Ультрафіолетові лампи у стерильній кімнаті знаходяться на відстані 1 метра від робочої поверхні. Персонал, який входить до стерильної кімнати, повинен носити стерилізований одяг та головні убори.
Наразі стерильні приміщення здебільшого існують на мікробіологічних заводах, тоді як у загальних лабораторіях використовуються чисті столи. Основною функцією чистого столу є використання ламінарного пристрою потоку повітря для видалення різного дрібного пилу, включаючи мікроорганізми, з робочої поверхні. Електричний пристрій дозволяє повітрю проходити через HEPA-фільтр, а потім потрапляти на робочу поверхню, завдяки чому робоча поверхня завжди перебуває під контролем потоку стерильного повітря. Крім того, збоку, ближче до зовнішньої сторони, є високошвидкісна повітряна завіса, щоб запобігти потраплянню зовнішнього бактеріального повітря.
У місцях зі складними умовами замість чистого столу можна використовувати дерев'яні стерильні коробки. Стерильна коробка має просту конструкцію та її легко переміщувати. На передній частині коробки є два отвори, які блокуються штовхально-тягаючими дверцятами, коли вона не працює. Ви можете просунути руки всередину під час роботи. Верхня частина передньої частини оснащена склом для полегшення внутрішньої експлуатації. Усередині коробки є ультрафіолетова лампа, а посуд та бактерії можна завантажувати через невеликі дверцята збоку.
Асептичні операційні методи наразі не лише відіграють ключову роль у мікробіологічних дослідженнях та застосуваннях, але й широко використовуються в багатьох біотехнологіях. Наприклад, трансгенні технології, технології моноклональних антитіл тощо.
Час публікації: 06 березня 2024 р.